PCR dijagnostika. Što je to u ginekologiji, hepatitis, tuberkuloza. Dešifriranja ispitivanja kako prolaze, trošak

U većini slučajeva, pacijenti moraju nositi s takvom situacijom, kada je ispit ili određivanje zahtijeva dijagnozu PCR bolesti. Važno je shvatiti što je to i što je potrebno.

Lančana reakcija polimeraze (PCR) - to je studija koja pomaže identificirati mnoge bolesti u ranim fazama razvoja. Njegova suština leži u pronalaženju DNA ili RNA prisutna u nekom organizmu patogena. PCR za određivanje uzročnika u slučajevima gdje druge vrste studija su neučinkoviti.

Zašto PCR dijagnostika je tako popularan?

Popularnost ove metode leži u njegovoj jednostavnosti i širinu primjene. To se koristi od strane kliničara za dijagnosticiranje raznih bolesti. To vam omogućuje da brzo obavljanje složenih kvantitativnih i genomske istraživanja.

Jedan od najvažnijih medicinskih primjena klasičnog PCR metoda je otkrivanje mikroorganizama, što može dovesti do patoloških stanja.

Bit PCR analizu

PCR dijagnostika (što je objašnjeno molekularne biologije) je metoda molekulske kloniranja koristi Analiza kratke DNA koji je prisutan u minimalnim količinama u uzorcima koji sadrže genetski materijal. Ova metoda se često naziva „kopirni DNK.”

PCR dijagnostika provedena in vitro (izvan tijela) u laboratoriju, a na osnovi prirodnog procesa udvostručenje DNA prije dijeljenja. Osim što mogu otkriti virus, bakterija ili drugih mikroorganizama u uzorku, PCR omogućuje identifikaciju njihove količine.

U bolestima kao što su infekcije s virusom hepatitisa C ili virus humane imunodeficijencije (HIV), virus opterećenje je dobar pokazatelj što fazi bolest je i kako je na snazi terapija.

Oružane s ovim informacijama, liječnici mogu odrediti kada će početi liječenje i praćenje procesa. To vam omogućuje da napravite individualni pristup svakom pacijentu.

PCR dijagnoza obuhvaća tri faze, od kojih je svaki na broj ciljnih DNA značajno povećava. Kao rezultat takve reakcije se dobije više od milijardu kopija originalne ili „ciljni” DNA, koji omogućuje da se procijeniti prisutnost virusa u tijelu. To je osnovna značajka metode PCR.

Prednosti i nedostaci metode

PCR dijagnostika (ono što je gore opisano) je opisan u detalje Kerry Mullis 1983. Budući da je metoda vrlo popularna u laboratoriju.

Glavne prednosti ove vrste istraživanja je:

• raznovrsnost;
• brzina rezultata;
• velika vjerojatnost dobivanja pouzdanih rezultata;
• specifičnost;
• razne bolesti, koja se može odrediti.

Mnogostranost postupka PCR je mogućnost koristiti bilo fiziološku ljudskog materijala. Čak i jedna dlaka dovoljno za analizu.

Proces obrade podataka, kroz automatizaciju, to može potrajati nekoliko sati. Posebnost je postavljanje određenog fragmenta DNA koji je karakterističan za određenu patogena. Korištenje PCR analiza mnogih bolesti se može dijagnosticirati kao što je povećan, a latentna faza toka.

No, unatoč velikom broju prednosti, PCR dijagnostička metoda ima neke nedostatke:

• vjerojatnost lažno pozitivnih rezultata;
• visoka osjetljivost;
• varijabilnost mikroorganizama.

Glavni nedostatak ove metode je nemogućnost razlikovanja između PCR žive mikroorganizme iz mrtvih. Tipično, to se odnosi na situaciju kada treba procijeniti uspješnost liječenja. U tom slučaju, ako se bolest liječi, mrtve stanice su još neko vrijeme u ljudskom tijelu, a njegova potpuna obnova zahtijeva određeno vrijeme od 4 do 6 tjedana.

Visoka osjetljivost je prednost i istodobno nedostatak. Neki mikroorganizmi prisutni u malim količinama u tijelu. Dakle, u ovom slučaju, ova dijagnostička metoda nije informativan, a savjetuje da koriste druge vrste istraživanja.

Bilo mikroorganizmi mogu mutirati. Pa čak i unatoč činjenici da je specifični fragment se koristi u procesu pojačanje koje Najmanje podložne promjeni, to još uvijek može steći mutacije i postati nevidljiv sustavi za ispitivanje. Ova situacija se objašnjava činjenicom da je niz laboratorijskih testova sustava može pokazati potpuno različite rezultate.

U kojim područjima metode

PCR studija može se koristiti u kliničkoj praksi za utvrđivanje različitih bolesti. Naširoko koristi u ginekologiji, urologiji, gastroenterologije, onkologije, itd.. Osim toga, učinkovito se koristi u forenzici identificirati i utvrditi očinstvo.

Ova vrsta istraživanja se koristi u fazi planiranja i tijekom trudnoće. Analiza bakljama infekcije provodi se otkriti prisutnost infekcije u žena. Bolesti uzrokovane jednim od infekcije mogu biti blagi oblik za ženu, ali da uzrokuje ozbiljne urođene mane fetusa, sve do svoje smrti.

Također dijagnostički PCR metoda pomaže identificirati genetske predispozicije za razvoj određenih bolesti u budućnosti.

Koji donosi infekcije dijagnozu PCR

PCR pomaže identificirati viruse, bakterije i gljivice.

Najčešće bolesti koje se mogu s njim dijagnozom:

• zarazne neurološke bolesti (meningitis, mijelitis);
• malignosti (leukemija, limfoma);
• virusnih bolesti (HIV, humani papilloma virus, citomegalovirus, enterovirus, virus hepatitisa, rubeola, adenovirusi i dr.);
• bakterijske infekcije;
• spolno prenosive infekcije (ureplazmoz, klamidija, Trihomonijaza);
• bolesti uzrokovanih gljivicama (kandidijaza, mikoplazmoza);
• herpesa;
• Filatov bolest;
• tuberkuloza, upala pluća, difterija, i virusni i bakterijski podrijetla;
• čirevi na želucu, H. pylori infekcije uzrokovanoj drugi.

Što su biološki materijali istraživane

S obzirom na bolest, simptomi i objektivnu istragu PCR dijagnostiku možete koristiti bilo koji tekući ili fiziološku narav komad tkanine.

To može biti:

• krv
• slina;
• sluz;
• urina;
• stolica;
• ždrijela obrisak;
• kriška zahvaćenom tkivu;
• sinovijalnoj tekućini;
• struganje vagine kod žena ili uretre u muškaraca;
• ejakulaciju;
• kosa i drugi.

U bolesti genitourinarnog sustava uzima urin bris iz rodnice u žena ili uretre u muškaraca. Venska krv je unajmio za dijagnozu bolesti kao što su HIV, hepatitis, tipa bakljama infekcije.

Kako bi se isključila ili potvrdila onkologije, tijekom operacije uklanjaju komada tkiva za biopsiju.

Kako se pripremiti za analizu

Pogotovo pripreme za studiju ovisi o biomaterial, što daje gore. Također, imajte na umu da morate eliminirati prijem antibiotika i drugih lijekova. Za praćenje učinkovitosti liječenja treba izdržati intervala nakon prijema lijekova za najmanje 4 tjedna.

najam krv u jutro na prazan želudac. Urin i feces treba staviti u dizajniran za to, apsolutno sterilnu posudu. Dakle, prije prikupljanja mokraće potrebno je provesti higijene vanjske organe genitalija.

Ako unajmite bris, morate:

• ne mokrenje tijekom 3 sata;
• to se ne preporuča za pranje i tuširati dan ranije (za žene);
• po danu za zaustavljanje seksualnog života;
• Papa žene trebaju uzeti u sredini ciklusa.

faze PCR analiza

Prije početka PCR DNA se mora izolirati iz uzorka. Izolacija DNA je postupak više koraka, koji se može provesti ručno ili instrumentalno.

Nakon priprave uzorka počinje PCR postupak koraka:

• Odvajanje ciljne DNA (denaturacije);
• pojačanje (umnažanje) DNA fragmenata;
• detekcija (identifikacija) u amplificiranim fragmentima DNA.

Prva faza PCR naziva denaturacije. Njegova suština je u tome što je cijev s uzorkom DNA je zagrijana na visoku temperaturu (oko 90 stupnjeva). Zbog visokih temperatura uništio slabe veze između nukleotida molekule formiraju kod. Rezultat je odvajanje dvolančane DNA ili RNA u dva odvojena vlakna.

Za „čistoće” biomaterial istraživačke studije prikupljati poseban rješenje koje otapa organske tvari. Trajanje ove faze ovisi o vrsti materijala i patogena.

PCR dijagnostika (što je opisano gore) u drugom stupnju vrši umnožavanje DNA fragmenata na osnovi najviše DNA infekcije. PCR ne kopirati cijeli nukleinske kiseline u uzorku. Ona kopira samo određeni redoslijed genetskog koda, kratki fragment (početnica).

U drugoj fazi, epruveta se ohladi. Cijeli proces je automatiziran pomoću PCR stroj, pod nazivom biciklista ili termostat, a može biti dovršen u nekoliko sati. PCR stroj programiran za promjenu temperature reakcijske smjese svakih nekoliko minuta. To se događa kako na kratkim fragmentima može kontaktirati s jednolančane predloška.

Pojačanje se javlja u 30-40 ciklusa. Tijekom tog razdoblja, liječnik asistent kopije DNA fragmenta i povećava broj lančanu reakciju metode. Dakle, sa svakim ciklusom broj kopija se povećava za nekoliko milijuna ili čak milijardama.

U trećoj fazi studije je identifikacija prisutnosti DNA virusa i bakterija. To se postiže pomoću raspodjele rezultirajuće smjese te dodavanje na njega posebno rješenje. Ta tekućina omogućuje fragmenti DNA steći određenu boju pod djelovanjem ultraljubičastog zračenja. To je znak da su prisutni u ljudskom tijelu su patogene bakterije.

PCR u trudnoći

PCR dijagnostika (ono što je opisano gore) može se primijeniti za prvi put tijekom trudnoće, kao što je obvezno. Ova metoda pomaže identificirati skrivene infekcije i opasnost od malformacija fetusa.

Za analizu pomoću:

• vaginalno obrisak;
• venske krvi;
• urina;
• amnionske tekućine i placenta tkiva;
• kralježnice ili zajednički tekućina.

Ima zarazne prirode bolesti, što može nepovoljno utjecati na fetalni razvoj, dolazi do grešaka, izazvati prerano rođenih i pobačaja. Oni su posebno opasni u prvom tromjesečju te u većini slučajeva, je medicinski indikacija za pobačaj. Ove infekcije imaju zajednički naziv bakljama kompleks.

PCR analiza pomaže da se utvrdi prisutnost ili odsutnost infekcije u trudnica. Često provodi u fazi planiranja trudnoće ili u prvom tromjesečju. U slučaju pozitivnog rezultata, to traje ponovio studiju. Tek nakon potvrde rezultata nakon tretmana.

PCR za dijagnozu HIV

PCR postupak za dijagnosticiranje infekcije HIV-om je skupo i analiza koristi za posebne indikacije. To uključuje donaciju, kao i da se može dati bolesnicima koji su pretrpjeli u prometnoj nesreći kod ljudi, HIV prijevoznika.

PCR pomaže utvrditi prisutnost infekcije u ranoj fazi prije nego što je tijelo razvilo antitijela na HIV. Rezultat je visok postotak studija vjerojatnosti može pokazati u roku od 5-14 dana nakon prodiranja virusa.

U drugim slučajevima, prisutnost virusa u ljudskom tijelu pomaže da se uspostavi imunnofermentny testa (ELISA). Definira HIV antitijela u ljudskom krvi koji počinje proizvoditi u 1-3 mjeseca nakon infekcije. Kvantitativno određivanje analiza mikroorganizama potrebno je pratiti liječenje bolesnika.

PCR za dijagnozu hepatitisa

Virus hepatitisa C je teška bolest koja može dovesti do razvoja ciroze. Razdoblje inkubacije, koji može biti i do 12 mjeseci, virus ne očituje, pacijent je praktički nije zarazan, a virus se ne može identificirati rutinskim pretragama krvi.

Najčešće, kada nepravovremenog liječenja, bolest postaje kronična i prijeti višestrukim komplikacijama.

Nakon infekcije hepatitisom B, razdoblje inkubacije je dugo, i nije prvi simptomi mogu se primijetiti već nakon 4 tjedna. Bilo je u tom periodu ELISA test može pokazati prisutnost virusa u tijelu.

PCR vam omogućuje da:

• identificirati bolesti u inkubacijski fazi razvoja;
• dopustiti upitne analize drugih studija;
• za procjenu učinkovitosti antivirusnu terapiju.

Odsustvo DNK-HBV provodi nakon liječenja - znak njegove učinkovitosti.

Test za tuberkulozu

Razvoj izaziva tuberkulozu tuberkuloze bacil koji mogu ući u ljudsko tijelo kapljicama zračnim putem. Bolest ima dva oblika: tajne i javan. U prvom slučaju, zaražena osoba nije nosilac infekcije i mikobakterija u ispljuvku ne mogu detektirati čak i PCR. Opasnost ovog obrasca još uvijek ima, kao što se može prenijeti na otvorenoj pozornici.

Otvoreno (aktivno) korak je opasnost za druge, čak iu slučaju strogo poštivanje pravila osobne higijene. Za dijagnosticiranje bolesti korištenjem fluorografiju, i X-zraka tomografije prsnog koša. Također se koristi za ovu svrhu uzorak tuberkulirovannuyu kože (Mantoux test). No, najučinkovitija metoda istraživanja je PCR.

U upotrebi kao u testiranim uzorcima:

• krv
• sluz;
• bronhije tekućina.

PCR za dijagnozu HPV

Dijagnoza HPV provodi u slučaju simptoma kao što su papilome i bradavice u području genitalija. Studija je također dodijeljen u fazi planiranja trudnoće u slučaju neplodnosti, pobačaja, a također u situaciji infekcije jednog od partnera, kao jedan od mehanizama za prijenos - seksualno.

Najopasniji nije sama prisutnost virusa u tijelu, a njegov tip. Neki od njegovih vrsta (16 i 18) su Visoki rizik i može uzrokovati rak vrata maternice u žena. PCR metoda se može primijeniti u kombinaciji s drugim vrstama istraživanja. Za analizu najčešće korištenih bris iz genitalnih organa. Krv, urin i vaginalni iscjedak kao biomaterial koristi vrlo rijetko.

herpes

Ova infekcija genitalnog ispitivanja dijagnoza tipovima herpes simpleks virus 1 i 2 (HSV1 / HSV2). S pozitivnim rezultatom, hsv2, treba testirati na HIV i druge spolno prenosive bolesti. Za analizu potrebna venska krv pacijenta. Također se može ispitati urin, izolaciju i sadržaj osip kada simptome.

PCR integrirani probir

U slučaju složenih čitanje ili PCR testovi mogu biti dodijeljena kako bi se spriječilo bolesti. Najčešće inicijator služi pacijenta, postoje slučajevi u kojima je naznačeno sveobuhvatan pregled za prevenciju izbijanja određenih bolesti u određenoj regiji.

PCR-12 - je sveobuhvatna studija koja obuhvaća sljedeće infekcije:

1. Hepatitis.
2. HIV-a.
3. Herpes.
4. Spolno prenosive bolesti.
5. Tuberkuloza.
6. Encefalitis.
7. Kandidijaza.
8. Helicobacter infekcija.
9. Citomegalovirus.
10. Mononukleoza.
11. Oncoviruses.
12. Listerioze.

Transkripcija PCR

Nakon analize PCR pozitivan ili negativan rezultat može biti zvučalo.

U slučaju pozitivnog rezultata, preporučujemo da ponovno puštanje ispitivanja i kvantitativne PCR studiju. To pomaže da se odredi koncentracija infekcije u tijelu za imenovanje odgovarajuće liječenje.

Točnost PCR dijagnostiku

U većini slučajeva, PCR dijagnostika pruža vrlo precizne rezultate. No, u nekim slučajevima, kako bi potvrdili ispravnost dijagnoze zahtjeva dodatne metode istraživanja.

Zbog onoga što se može dobiti lažno rezultat?

Lažno pozitivni rezultati mogu se dobiti kao rezultat nepravilne prikupljanje i analizu najvažnijih postupaka istraživanja.

Pacijent može biti krivac lažnog sadržaja informacija u slučaju neadekvatne pripreme za isporuku biomaterial. Opremljeni laboratoriji i profesionalni liječnik može izravno utjecati na rezultate istraživanja.

Gdje ići PCR dijagnostiku

PCR dijagnostika se obavlja u privatnim klinikama i laboratorijima za liječnički pregled ili na inicijativu pacijenta u svrhu prevencije. Prednost treba dati klinikama i laboratorijima s modernom opremom, da ne postoji prva godina u medicinskom tržištu i koji su se dokazali.

PCR analiza: trošak i vrijeme

Ova metoda dijagnoze visoke vrijednosti je drugačiji. Njegova cijena se kreće od 200 do 500 rubalja za svaku vrstu. Sveobuhvatna anketa o prisutnosti višestrukih infekcija može značajno uštedjeti novac, u usporedbi s plaćanjem svakog pojedinog studija.

Razdoblje istrage ovisi o vrsti infekcije, a može trajati od 1 do 5 dana. Isto tako, ove brojke ovise o opremanju laboratorija i osposobljavanje zdravstvenih djelatnika.

PCR dijagnostika (koji je detaljno opisan u ovom članku) je najprecizniji i brza metoda za proučavanje. To je jedan od najvažnijih otkrića u dvadesetom stoljeću. u području medicine.

S ovom metodom postalo je moguće izliječiti mnoge bolesti. Ali ne zaboravite da je PCR ima neke nedostatke, a njegova djelotvornost raste ponekad u kombinaciji s drugim metodama.

Registracija članka: Vladimir Veliki

Video o PCR dijagnostiku

O PCR točnosti: