Diagnostica PCR. Che cosa è in ginecologia, l'epatite, la tubercolosi. test decifratura come passaggio, il costo di

Nella maggior parte dei casi, i pazienti hanno a che fare con una situazione del genere, quando l'esame o la determinazione richiede PCR diagnosi della malattia. E 'importante capire che cosa è e ciò che è necessario.

reazione a catena della polimerasi (PCR) - si tratta di uno studio che aiuta a identificare molte malattie nelle prime fasi di sviluppo. La sua essenza sta nel trovare un DNA o RNA presenti in un patogeno organismo. PCR per determinare l'agente causale nei casi in cui altri tipi di studi sono inefficaci.

Perchè la diagnosi PCR è così popolare?

La popolarità di questo metodo sta nella sua semplicità e l'ampiezza di utilizzo. E 'utilizzato dai medici per diagnosticare varie malattie. Esso consente di effettuare rapidamente quantitativa complesso e la ricerca genomica.

Uno dei più importanti classico metodo PCR applicazioni mediche è la rivelazione di microrganismi, che può causare condizioni patologiche.

L'essenza del PCR

diagnostica PCR (si spiega biologia molecolare) è un metodo di clonazione molecolare utilizzato per analisi di breve sequenza di DNA che è presente in quantità minime in campioni contenenti un genetico materiale. Questo metodo è spesso definito come "il DNA copiatrice."

diagnostica PCR effettuate in vitro (fuori del corpo) in laboratorio, e in base al processo naturale di raddoppiare DNA prima della sua divisione. Oltre ad essere in grado di rilevare i virus, batteri o altri microrganismi nel campione, PCR permette l'identificazione della loro quantità.

In malattie come l'infezione da virus dell'epatite C o virus dell'immunodeficienza umana (HIV), il virus carico è una buona indicazione di quale fase della malattia è e quanto sia efficace è la terapia.

Grazie a queste informazioni, i medici in grado di determinare quando iniziare il trattamento e monitorare il processo. Questo ti permette di fare un approccio individuale per ogni paziente.

diagnosi PCR comprende tre fasi, in ciascuna delle quali il numero di aumenti del DNA bersaglio significativamente. Come risultato di una tale reazione si ottiene oltre un miliardo di copie del DNA o di originale, "target", che permette di valutare la presenza del virus nel corpo. Questa è la caratteristica fondamentale del metodo PCR.

Vantaggi e svantaggi del metodo

Diagnostica PCR (ciò che è descritto sopra) è stata descritta in dettaglio Kerry Mullis nel 1983. Poiché il metodo è molto popolare in laboratorio.

I principali vantaggi di questo tipo di ricerca è:

• versatilità;
• la velocità dei risultati;
• un'alta probabilità di ottenere risultati affidabili;
• specificità;
• varietà di malattie, che può essere determinato.

La versatilità del metodo PCR è la possibilità di utilizzare qualsiasi materiale fisiologico umano. Anche un capello sufficiente per l'analisi.

Il processo di elaborazione dati, attraverso l'automazione, può richiedere diverse ore. Specificità è di assegnare uno specifico frammento di DNA che è caratteristica per un particolare agente patogeno. Utilizzando l'analisi PCR di molte malattie può essere diagnosticata come essere aumentato, e la fase latente del flusso.

Ma, nonostante l'enorme numero di vantaggi, metodo diagnostico PCR ha alcuni svantaggi:

• la probabilità di risultati falsi positivi;
• elevata sensibilità;
• variabilità dei microrganismi.

L'inconveniente principale del metodo è l'incapacità di distinguere tra PCR microrganismi viventi che morto. In genere, questo si riferisce ad una situazione in cui è necessario valutare il successo del trattamento. In questo caso, se viene trattata la malattia, le cellule morte sono ancora qualche tempo nel corpo umano ed il suo aggiornamento completo richiede un certo tempo da 4 a 6 settimane.

Alta sensibilità è un vantaggio e allo stesso tempo uno svantaggio. Alcuni microrganismi sono presenti in piccole quantità nel corpo. Pertanto, in questo caso, questo metodo diagnostico non è informativo, e consiglia di utilizzare altri tipi di ricerca.

Microrganismi possono mutare. E anche nonostante il fatto che il frammento specifico utilizzato nel processo di amplificazione, che Almeno soggetti a modifiche, può ancora acquisire mutazioni e diventare invisibili a sistemi di test. Questa situazione si spiega con il fatto che una serie di test di laboratorio del sistema possono avere risultati completamente diversi.

In quali aree del metodo

studio PCR può essere utilizzato nella pratica clinica per l'identificazione di varie malattie. Ampiamente usato in ginecologia, urologia, gastroenterologia, oncologia, ecc.. Inoltre, si è effettivamente utilizzato in medicina legale per identificare e stabilire la paternità.

Questo tipo di ricerca viene utilizzato nella fase di progettazione e durante la gravidanza. Analisi del TORCH-infezione è effettuata per rilevare la presenza di infezione nelle donne. Malattie causate da una delle infezioni possono essere lieve forma per la donna, ma per causare gravi anomalie congenite del feto, fino alla sua morte.

Anche Metodo PCR diagnostico aiuta a identificare una predisposizione genetica a sviluppare determinate malattie in futuro.

Che porta la diagnosi di infezione da PCR

PCR aiuta a identificare virus, batteri e funghi.

Le malattie più comuni che possono essere diagnosticati con esso:

• malattie infettive neurologiche (meningite, mielite);
• neoplasie (leucemia, linfoma);
• malattie virali (HIV, virus umano papilloma, citomegalovirus, enterovirus, virus dell'epatite, rosolia, adenovirus e al.);
• infezioni batteriche;
• infezioni a trasmissione sessuale (ureplazmoz, clamidia, tricomoniasi);
• malattie causate da funghi (candidosi, micoplasmosi);
• herpes;
• La malattia di Filatov;
• la tubercolosi, la polmonite, la difterite, sia virali e origine batterica;
• ulcere gastriche, infezione da H. pylori provocata da altri.

Quali sono i materiali biologici indagati

Data la malattia, i sintomi, e obiettivo esame della diagnostica PCR può usare qualsiasi natura liquida o fisiologico di un pezzo di tessuto.

Questo può essere:

• il sangue;
• saliva;
• catarro;
• urine;
• feci;
• tampone orofaringeo;
• fetta del tessuto interessato;
• liquido sinoviale;
• raschiando della vagina nelle donne o l'uretra negli uomini;
• eiaculare;
• capelli e altri.

Nelle malattie del sistema genito-urinario è preso urina tampone dalla vagina nelle donne o l'uretra negli uomini. Il sangue venoso affittati per la diagnosi di malattie come l'HIV, l'epatite di tipo, torcia-infezione.

Al fine di escludere o confermare oncologia, durante l'intervento chirurgico sono pezzi di tessuto rimosso per una biopsia.

Come prepararsi per l'analisi

Soprattutto i preparativi per lo studio dipende dalla biomateriale, che si arrende. Inoltre, essere consapevoli che è necessario eliminare la ricezione di antibiotici e altri farmaci. Per monitorare l'efficacia del trattamento dovrebbe sopportare intervallo dopo il ricevimento di farmaci per almeno 4 settimane.

affitto di sangue al mattino a stomaco vuoto. Urina e feci devono essere messi in progettato per questo, contenitore assolutamente sterile. Pertanto, prima di raccogliere l'urina è necessario condurre igiene organi genitali esterni.

Se si affitta una sbavatura, è necessario:

• non urinare per 3 ore;
• non si consiglia di lavare e Acquazzoni il giorno prima (per le donne);
• al giorno per fermare la vita sessuale;
• donne Pap dovrebbero prendere a metà del ciclo.

fasi di analisi PCR

Prima dell'inizio della PCR, il DNA deve essere isolato dal campione. Isolamento del DNA è un processo in più fasi che può essere eseguita manualmente o strumentalmente.

Dopo la preparazione del campione inizia passo processo di PCR:

• separazione del DNA bersaglio (denaturazione);
• amplificazione (moltiplicazione) di frammenti di DNA;
• rilevamento (identificazione) dei frammenti di DNA amplificati.

La prima fase della PCR è chiamato denaturazione. La sua essenza è che la provetta con il campione di DNA viene riscaldato ad una temperatura elevata (circa 90 gradi). A causa delle alte temperature distrutto i legami deboli tra i nucleotidi formano codice molecole. Il risultato è la separazione di DNA a doppio filamento o RNA in due tratti separati.

Per la "purezza" studio di ricerca biomateriale maturare speciale soluzione che dissolve le sostanze organiche. La durata di questa fase dipende dal tipo di materiale e l'agente patogeno.

diagnostica PCR (ciò che è descritto sopra) al secondo stadio esegue la moltiplicazione dei frammenti di DNA sulla base della maggior infezione DNA. PCR non copia l'intero acido nucleico nel campione. Copia solo la specifica sequenza del codice genetico, un breve frammento (primer).

Nella seconda fase il tubo viene raffreddato. L'intero processo è automatizzato utilizzando una macchina PCR, chiamata cycler o termostato, e può essere completato in poche ore. Macchina PCR è programmata per variare la temperatura della miscela di reazione ogni pochi minuti. Questo accade per brevi frammenti potrebbe contatto con il modello a singolo filamento.

Amplificazione avviene in 30-40 cicli. Durante questo periodo, assistenti copie medico frammento di DNA e aumenta il numero di metodo di reazione a catena. Così, con ogni ciclo il numero di copie aumenta a diversi milioni o addirittura miliardi.

Nella terza fase dello studio è l'identificazione della presenza di DNA di virus e batteri. Questo si ottiene la distribuzione della miscela risultante e aggiungendo una soluzione speciale. Questo liquido permette i frammenti di DNA di acquisire una certa colorazione sotto l'azione dei raggi ultravioletti. Questa è un'indicazione che i batteri patogeni sono presenti nel corpo umano.

PCR durante la gravidanza

diagnostica PCR (ciò che è descritto sopra) possono essere somministrati per la prima volta durante la gravidanza, è obbligatorio. Questo metodo aiuta a identificare l'infezione nascosta e la minaccia di malformazioni nel feto.

Per l'analisi utilizzando:

• tampone vaginale;
• sangue venoso;
• urine;
• liquido amniotico e tessuti placenta;
• liquido spinale o congiunto.

Ci natura infettiva della malattia, che possono influenzare negativamente lo sviluppo fetale, provocando difetti, causare parti prematuri e aborti. Sono particolarmente pericoloso nel primo trimestre e, nella maggior parte dei casi, è un'indicazione medica per l'aborto. Queste infezioni hanno un nome comune TORCH-complesso.

analisi PCR aiuta a stabilire la presenza o l'assenza di infezione in donne in gravidanza. Spesso effettuata in fase di pianificazione della gravidanza o nel primo trimestre. In caso di esito positivo, si prende ripetuto lo studio. E 'stato solo dopo la conferma dei risultati dopo il trattamento.

PCR per la diagnosi di HIV

PCR per la diagnosi di infezione da HIV è l'analisi costosa e utilizzati per particolari indicazioni. Questi includono la donazione, così come può essere somministrato a pazienti che hanno subito in un incidente stradale con persone, portatori di HIV.

PCR aiuta a stabilire la presenza di infezione nelle prime fasi prima che il corpo ha sviluppato anticorpi anti HIV. Il risultato è un'alta percentuale di probabilità di studio può mostrare entro 5-14 giorni dopo la penetrazione del virus.

In altri casi, la presenza del virus nel corpo umano aiuta a stabilire saggio imunnofermentny (ELISA). Definisce anticorpi HIV nel sangue umano che comincia a produrre in 1-3 mesi dopo l'infezione. La determinazione quantitativa dell'analisi dei microrganismi è necessario monitorare il trattamento dei pazienti.

PCR per la diagnosi di epatite

Il virus dell'epatite C è una malattia grave che può portare allo sviluppo di cirrosi. Il periodo di incubazione, che può essere fino a 12 mesi, il virus non si manifesta, il paziente è praticamente non è contagiosa, e il virus non può essere identificato da esami del sangue di routine.

Il più delle volte, quando il trattamento prematura, la malattia diventa cronica e minacciato da molteplici complicanze.

Al momento l'infezione da epatite B, il periodo di incubazione è lungo, e non i primi sintomi possono essere osservati dopo solo 4 settimane. E 'stato durante questo periodo ELISA può mostrare la presenza del virus nel corpo.

PCR consente di:

• per identificare la malattia in una fase di incubazione di sviluppo;
• consentire analisi discutibili di altri studi;
• per valutare l'efficacia della terapia antivirale.

L'assenza di DNA di HBV-condotto dopo il trattamento - un segno della sua efficacia.

Saggio per la tubercolosi

Sviluppo provoca bacillo della tubercolosi della tubercolosi che possono entrare nel corpo umano da goccioline di bordo. La malattia ha due forme: segrete e palesi. Nel primo caso, una persona infetta non è un vettore di infezione e micobatteri nell'espettorato non può essere rilevato anche mediante PCR. Il pericolo di questa forma ha ancora, come può essere trasferito a una fase aperta.

Open (attivo) passo è un pericolo per gli altri, anche in caso di stretta osservanza delle norme di igiene personale. Per la diagnosi della malattia utilizzando fluorography, e la tomografia a raggi X del torace. Utilizzato anche per questo scopo campione di pelle tuberkulirovannuyu (test di Mantoux). Ma il metodo più efficace di ricerca è la PCR.

In uso come i campioni di prova:

• il sangue;
• catarro;
• liquido bronchi.

PCR per la diagnosi di HPV

La diagnosi di HPV eseguita in caso di sintomi come papillomi e verruche nella zona genitale. Lo studio ha inoltre assegnato in fase di pianificazione della gravidanza in caso di infertilità, aborti spontanei, e anche in una situazione di infezione di uno dei partner così come uno dei meccanismi di trasmissione - sessuale.

Il più pericoloso non è la presenza del virus nel corpo, e il suo tipo. Alcune delle sue tipologie (16 e 18) sono ad alto rischio e possono causare il cancro cervicale nelle donne. Il metodo PCR può essere somministrato in combinazione con altri tipi di ricerca. Per analizzare il tampone più comunemente usato dagli organi genitali. Sangue, urina e perdite vaginali come biomateriale utilizzato molto raramente.

erpete

Questa infezione genitale diagnosi di prova da tipi di virus Herpes simplex 1 e 2 (HSV-1 / HSV2). Con un risultato positivo, HSV2, dovrebbero essere testati per l'HIV e altre malattie sessualmente trasmissibili. Per l'analisi richiede sangue venoso del paziente. può anche essere indagato l'urina, l'isolamento e il contenuto eruzioni cutanee quando i sintomi.

lo screening PCR integrato

Nel caso di lettura o PCR complessi possono essere assegnati per prevenire malattie. Il più delle volte l'iniziatore serve il paziente, ci sono casi in cui un esame completo è indicato per la prevenzione di focolai di alcune malattie in una particolare regione.

PCR-12 - è uno studio completo che copre le seguenti infezioni:

1. Epatite.
2. HIV.
3. Herpes.
4. Malattie sessualmente trasmissibili.
5. Tubercolosi.
6. Encefalite.
7. Candidosi.
8. infezione da Helicobacter.
9. Citomegalovirus.
10. Mononucleosi.
11. Oncovirus.
12. Listeriosi.

Trascrizione analisi PCR

Dopo l'analisi di PCR risultato positivo o negativo può essere suonato.

In caso di esito positivo, si consiglia di ri-messa in test e studi PCR quantitativa. Questo aiuta a determinare la concentrazione di infezioni nel corpo per la nomina di un trattamento adeguato.

L'accuratezza della PCR diagnostica

Nella maggior parte dei casi, di PCR diagnostica fornisce risultati estremamente precisi. Ma in alcuni casi, per confermare la correttezza della diagnosi richiede metodi di ricerca aggiuntivi.

A causa di ciò che può ottenere un risultato falso?

risultati falsi-positivi possono essere ottenuti a seguito della raccolta e l'analisi delle procedure più ricerca improprio.

Il paziente può essere il colpevole di falsa contenuto informativo in caso di insufficiente preparazione per la consegna di biomateriale. laboratori attrezzati e medico professionale possono influenzare direttamente i risultati dello studio.

Dove andare la diagnostica di PCR

PCR diagnostici è realizzato in cliniche private e laboratori per la nomina di un medico o su iniziativa del paziente a fini di prevenzione. Occorre dare la preferenza a cliniche e laboratori con attrezzature moderne, che non ci sia il primo anno nel mercato medico e si sono dimostrati.

PCR: costi e tempi

Questo metodo di diagnosi di alto valore è diverso. Il suo prezzo varia da 200 a 500 rubli per ciascuna specie. un'indagine completa della presenza di infezioni multiple può risparmiare in modo significativo i soldi, rispetto al pagamento di ogni singolo studio.

Il periodo dell'inchiesta dipende dal tipo di infezione, e può richiedere da 1 a 5 giorni. Inoltre, queste cifre dipendono dal allestimento di laboratori e la formazione del personale medico.

Diagnostica PCR (che è descritto in dettaglio in questo articolo) è il metodo più accurato e veloce per lo studio. Si tratta di una delle più importanti scoperte del XX secolo. nel campo della medicina.

Con questo metodo è stato possibile per la cura di molte malattie. Ma non dimenticate che la PCR ha alcuni svantaggi, e la sua efficacia aumenta a volte in combinazione con altri metodi.

Registrazione di questo articolo: Vladimir il Grande

Video di PCR diagnostica

A proposito di accuratezza PCR: