Takket være utviklingen av moderne medisin, legen i diagnosen ikke lenger trenger å stole på indirekte manifestasjoner av sykdommen eller å utføre flertrinns laboratorieundersøkelser. Nok til å holde en test som vil bekrefte eller avkrefte den påståtte første diagnosen.
Denne metoden er en enzymkoblet immunosorbent assay (ELISA) - Denne studien viser spesifikke antistoffer og antigener som ligger i en rekke forskjellige sykdomstilstander, noe som gir raskere i stor grad plante diagnose.
I denne artikkelen:
- 1 Hva er ELISA
- 2 typer av immunoglobuliner
- 3 Indikasjoner for levering analyse immunoglobuliner
- 4 Klargjøring for levering av analyse
- 5 Fremgangsmåten for å ta prøver
- 6 Hvordan analyse
- 7 Når analysen er ferdig
- 8 Forsøksresultatene og deres tolkning
- 9 Betydning testresultater
- 10 Fordeler og ulemper analyse
- 11 Hvorfor resultatet kan være misvisende
- 12 Kostnaden av studien
- 13 Video av ELISA-analysen
Hva er ELISA
ELISA-analyse - det takoelaboratornoe studie (metode), som bidrar til å bestemme tilstedeværelsen eller fraværet av visse antistoffer i kroppen for å bekjempe viruset og deres antall.
Grunnlaget for undersøkelsen er en naturlig reaksjon til et antigen (et skadelig objekt legeme) - antistoff (Protein ødelegger malware) som lar deg oppdage tilstedeværelsen av en rekke virus, bakterier.
ELISA er en naturlig immunrespons - interaksjon mellom antistoffet og det tilsvarende antigen. Så under IFA i røret sammen med det materiale som blir lagt vekselvis antigener eller antistoffer, etter som det er påvisning av konsentrasjonen av de resulterende antigen-antistoffkomplekser.
Hvis fyrstikker ble dannet, så er det immunkomplekser ytterligere enzymatiske reaksjon oppstår med et fargemateriale forent molekyl. Det er på grunn av en endring i farge i løpet av den enzymatiske indikasjonen skjer etter identifisering av sykdoms studium nivå definert forbindelse.
typer av immunoglobuliner
Humane immunglobuliner differensiere i flere klasser, forskjellige egenskaper for strukturen og antigene egenskaper av tungkjeder (H-kjeder). I alle pattedyr, inkludert menneske, isolerte fem H-kjeder, som bestemmer immunoglobuliner som hører til de respektive klassene: G, M, A, D, E.
Hver klasse skiller seg fra hverandre biologiske egenskaper, og evnen til å binde antigener, og hastigheten og bindingsstyrken med molekylet.
Funksjonene til hver immunoglobulin (lg) er forskjellige:
| Antall kroppen | funksjoner | Halveringstid (dager) | verdi | |
| G | 70% | Danner en passiv immunitet hos nyfødte; nødvendig for immunresponsen forbedre fagocytose, |
21-24 | gi lang humoral immunitet i infeksjonssykdommer |
| M | 5-10% | Vi trenger å aktivere fagocytose, er i stand til å binde antigen 5 molekyler |
5 | Det gir primær immunrespons |
| En | 10-15 | Nøytraliserer giftstoffer og virus nødvendig for dannelsen av tidlig immunitet Dannelsen av lokal immunitet |
4-5 | slimhinnene forsvar |
| E | 0,2% | forårsake allergier og anafylakse aktivert basophils vev | 2 | Beskyttelse mot parasitter |
| D | 0,2% | som er involvert i utvikling av lymfocytter, er nødvendig som en membranreseptor for antigenet; | 3 | Deres rolle er lite studert |
Fremveksten av immunoglobulin skjer ved en slags "kjede» - IgM IgG, på den måten at kroppen reagerer på utseendet av legemet i det antigenet. Under laboratoriediagnostisering vurderer konsentrasjonen av tre store immunoglobulin - G, M, A.
Indikasjoner for levering analyse immunoglobuliner
ELISA analyse blir stadig mer populært for hvert år.
Slik forskning akselererer diagnose setningen, noe som er meget viktig for behandling av patologier som for eksempel:
- viral hepatitt;
- HIV-infeksjon;
- cytomegalovirus,
- Epstein-Barr virus,
- herpes virus,
- meslinger
- røde hunder,
- tuberkulose,
- salmonellose,
- dysenteri,
- tick-borne encephalitis,
- Helicobacter-bakterier,
- Lyme sykdom,
- stivkrampe,
- syfilis,
- difteri,
- leptospirose,
- klamydia,
- ureaplasmosis,
- mycoplasmosis,
- kikhoste.
Den samme analyse kan identifisere infeksjon av parasitter:
- flat~~POS=TRUNC
- Ascaris
- gistolicheskimi amøber,
- tremadami lever,
- Giardia,
- Toxoplasma,
- trikiner,
- lykketreff,
- cestodosis.
ELISA er en unik markør for autoimmune sykdommer og kreft.
Klargjøring for levering av analyse
I forberedelsene til undersøkelsen bør følge disse reglene:
- en dag før blodprøvetaking kan ikke røyke og drikke alkohol,
- ikke å engasjere seg i idrett eller andre fysiske aktiviteter,
- prøv å unngå stress
Før du passerer ELISA analyse, er det nødvendig å unngå stress. - å stoppe bruken av narkotika ikke senere enn 10 dager før prosedyren.
De samme leger anbefaler å holde seg til en spesiell diett - for å utelukke fet og stekt mat, og hvis forskning utført på hepatitt, bør du ikke spise noen oransje grønnsaker, og spesielt sitrus. Donere blod skal være i morgen på tom mage.
Falsk positiv analyse er på grunn av de utestående anbefalinger, spesielt fet mat, Det fører til for høye konsentrasjoner av triglyserider i plasma, på grunn av hvilke ledningsevne ELISA avtar.
Fremgangsmåten for å ta prøver
I fullblod, kan serum eller plasma fra venøst blod anvendes som testmateriale. Gjerde materiale, vanligvis utført fra cubital vene er brukt for dette formål engangsnål og et vakuumrør, 5-10 ml blod er nødvendig.
For nøyaktige resultater er det viktig å følge riktig teknikk for prøvetaking - en punktering av fartøyet og omkringliggende vev må gjøres en manipulasjon, slik at den bruker en kort nål med en større diameter, slik at den ikke skader den motsatte vegg av venen og ikke skades erytrocytter.
Bare for å bevare integriteten av røde blodceller, er det nødvendig at blodet dryppe ned på veggene i rørene.
Under lagring, bør materialet unngås som mulig ionisering dessuten at materialet ikke bør være i kontakt med rester desinfeksjonsmidler, så bare brukt engangsanordning plastampulle merket pasientens navn, dato og tidspunkt for levering materiale.
Om ønskelig kan en kort lagring av materialet, blir kjølekammeret brukes med en temperatur på 2-4 omtrentC, eventuelt en lengre lagringstid, blir materialet frosset ved -20 omtrentS.
Hvordan analyse
Etter fremstillingen av materialet lege assistent fortsetter til de nødvendige manipulasjoner. For dette formål er en rekke spesielle sett av antigener, slukke egenskap provosere reaksjoner i kroppen til en stimulus er en rekke infeksjoner, hormoner, allergener.
Ordningen "antigen-antistoff" forventet svar ser slik ut:
- Første reaksjon - definert Ig (Ab) og renset patogen antigen (Ag).
- For detektering av de resulterende immunkompleksene fulgt ny immunologisk reaksjon hvor antigen-spesifikke handlinger assosiert Ig, og antistoff til den stikker konyugat- Ig (Ab).
- Den siste fasen - den enzymatiske reaksjon, sammen med katalysatoren molekyl-konjugat. Substratet virker som kromogen (ikke farget), som under reaksjonen er farget, og fargeintensiteten ble bestemt og kvantitativ indeks for en immunoglobulin i en prøve.
I dag har utviklet et bredt utvalg av ELISA-varianter, mangler en klar klassifisering av dem. Vanligvis er fremgangsmåter vurderes på grunnlag av dens separering i hetero- og homogent - alle analysefasen foregår ved hjelp av fast fase eller ved hjelp av bare løsning.
Moderne kliniske diagnoselaboratorier vanligvis bruker en heterogen (fast fase), ELISA, er det ment en fast fase absorpsjon antigener eller antistoffer på den faste overflate av spesielle hull som befinner seg på polystyren mikro metode er delt i direkte og indirekte ELISA.
I den direkte ELISA, antigenet innført ved reparasjoner under inkuberingen prosessen i tomme brønner overflaten for denne prøven materialet er plassert i rene brønner i 20-25 minutter, er det nødvendig å feste til sitt antigen overflaten. Deretter ble tilsetningen av det ønskede antistoff. Videre forblir materialet i en viss tid for å danne bindinger.
Antistoffer er alltid i overskudd, slik at selv dersom de er tilstede i prøven er ikke-assosierte antigener, og antigener, hvis ikke i det hele tatt, koblingene vil ikke bli. For å fjerne den "ekstra" antistoff blir utført ved dekantering, slik at bare de antistoffer som har etablert kommunikasjon med antigenet.
Dette etterfølges av den enzymatiske reaksjon - tillegg til brønnene med enzym-løsning, hvoretter farging opptrer avledet bindinger.
I den indirekte ELISA-metode som benyttes antistoffer på forhånd koblet til substratet av den enzymatiske reaksjon; i dette tilfellet kobling av antistoffer til antigenet oppstår i løpet av rugeprosessen, som finner sted etter mobilisering av bindinger på overflaten hullene og fylt i påfølgende konjugat og substrat-fargestoff kromogent reagens reaksjon.
Således er hovedforskjellen fra den direkte av indirekte metoden ikke materiale til klebeflaten rense brønnene, og bindingen til antigenet immobilisert på platen.
Stanser reaksjonen ved hjelp av spesialiserte anordninger er hver brønn underkastes ytterligere prosess fotometri, etterfulgt av sammenlignende analyse av resultatet oppnådd med tidligere foretatt kontroll prøver.
Dersom den detekterte økningen i optisk tetthet i prøven blir så blåst opp, og konsentrasjonen av spesifikke antistoffer i testresultatet.
Når analysen er ferdig
Studien tar ikke mye tid fra blodprøvetaking for å få resultatet går fra 1 til 10 dager, avhengig av diagnostiske tiltak.
Forsøksresultatene og deres tolkning
På skjemaet, et resultat som oppnås ved å diagnostisere pasienten indikerer en negativ eller positiv visse klasser av immunoglobuliner, som angitt kvantitativt mål for forskjellige klasser antistoffer.
Annen tolkning av resultatene:
- IgM (+) (IgA, IgG ble ikke påvist) - helbredende prosess;
- IgM (-), IgG (+), IgA (+) - kronisk infeksiøs patologi;
- IgM, IgG, IgA (alle s - verdi) - ingen mekanismer til infeksjon;
- IgG (+/-) og IgA (+/-), IgM (+) - akutt prosess;
- IgM (-), IgA (-), IgG (+) - postinfectious immunitet;
- IgM, IgG, IgA (+) - kronisk patologi i akutt stadium.
For eksempel, dersom den detekterte var IgG og IgM, pasienten kan ha en av disse sykdommer;
- viral hepatitt;
- cytomegalovirus;
- herpes;
- kopper;
- klamydia;
- stafylokokk eller streptokokkinfeksjon.
Enzymimmunoassay er ofte foreskrevet for hormonstudier, reglene er vist i tabellen nedenfor:
| Navnet på hormon | Paul | norm | |
| 1 | tyreoglobulin | m / f | 70 IE / ml |
| 2 | tyroksin | m / f | 64 til 146 nmol / L |
| 3 | trijodtyronin | m / f | 1,8 til 2,8 nmol / l |
| 4 | gratis tyroksin | m / f | 11-25 pmol / L |
| 5 | gratis triyodritonin | m / f | 4,49-9,3 pmol / L |
| 6 | Testosteron, dihydrotestosteron | F | 0,5 til 10 mlU / l |
ELISA-analyse - det er en diagnostisk test som evaluerer sannsynligheten for kreft. Imidlertid er tolkningen av resultatene utføres av behandlende lege.
Betydning testresultater
ELISA for deteksjon av forskjellige former av seksuelt overførbare sykdommer, inkludert syfilis, og blir ofte anvendt for screening av gravide kvinner.
Gjennom denne studien kan du lære av infeksjonen og stadium av sykdommen på tidspunktet for undersøkelsen:
- immunoglobuliner M si om varigheten av sykdommen;
- IgA - pasienten er infisert med mer enn 30 dager siden,
- IgG er funnet på "peak" sykdom, eller på et tidspunkt når behandlingen nylig avsluttet.
Studien brønner på platen med en negativ indeks er fargeløse og positiv malt i lys gul farge. Hvis fargen på positive brønner er forskjellig fra fargen på kontrollen, blir resultatet ansett som tvilsomt og må være re-studien.
Linked immunosorbent assay - er det første trinnet i diagnostisering av HIV. En analyse kan ikke være umiddelbart etter den påståtte infeksjon må avvente slutten av inkubasjonsperioden (fra 14 dager til 6 måneder).
Under analyse av antistoffer mot HIV-1 og HIV-2, er det en søke AT klasse G, som vanligvis vises senere stadier og AT klasse A og M, kan være definert i de tidlige stadier (under inkubasjonen periode).
fulgt ved mottak av positive prøver:
- Hvis den første testen var positiv, blodet igjen kontrolleres på nytt ved et annet laboratorium assistent;
- et andre positivt resultat antyder kontinuasjonseksamen materialet
- gjentagelse resultat, blir pasienten tilordnet immunoblotting.
Den endelige konklusjon om tilstedeværelse av HIV-infeksjon skal utstedes bare etter at resultatet av immunoblotting.
ELISA er også brukt som et diagnostisk undersøkelse av tuberkulose, men om pasienten har hadde antistoffer mot denne sykdommen, er det ikke alltid bekrefter tilstedeværelsen av tuberkulose, så EIA blir ofte brukt som en metode for å angi enten den samme for diagnostisering av latent ekstrapulmonær form.
ELISA-analyse - det er en studie som gjør det mulig å detektere en pasient infisert med parasitter og protozoer, i løpet av diagnostikk kan bestemmes selv tidspunktet for infeksjon.
| klamydia | cytomegalovirus | skadedyr |
| IgM Detekterer 7 dager etter infeksjon | IgM påvises 30-45 dager etter infeksjon eller i løpet av reaktivering av infeksjon i 4-6 måneder | Studien bestemt IgME. IgG- kroniske stadium av infeksjonen |
| IgA - infeksjon forekom mer enn 30 dager siden | ||
| IgG - invasjon er i den akutte fasen | ||
| IgG - bekrefter diagnose og viser effektivitet |
Fordeler og ulemper analyse
IFA har mange fordeler, som forklarer sin popularitet blant leger og pasienter, er det:
- høy nøyaktighet av resultatet,
- rimelig pris,
- raske resultater,
- avslørende stadium av sykdommen,
- kontroll av dynamikken av sykdommen.
Imidlertid, på linje med de fordeler og ulemper eksisterer - i sjeldne tilfeller, er analysen falske positive eller falske negative.
Hvorfor resultatet kan være misvisende
Feil kan oppstå som et resultat på grunn av tekniske brudd, er den samme analysen upålitelig hos personer med noen kroniske sykdommer (reumatoid faktor) der karakteristikken er utviklingen av spesifikt antistoffer.
Også på det endelige resultatet er påvirket av bruken av pasientens medisinering og stoffskifteforstyrrelser. Av disse grunner er et positivt resultat for HIV og cancer patologi krever re-ferdigstilling tester.
Kostnaden av studien
IFA Pris varierer avhengig av de diagnostiske områder (rub.):
- hepatitt 250 -900;
- Virus - 250 -1000;
- Hiv - 250-350;
- parasittangrep - 280-900;
- Syfilis -150 til 250;
- soppinfeksjoner 400-500.
Linked Immunosorbent Assay blod er en av de mest effektive metoder for forskning av mange virale sykdommer, parasittiske infeksjoner, onkologiske sykdommer. Slik forskning som IFA letter i stor grad den diagnose setningen, men denne analyse bør ikke tolkes uavhengig av pasienten, må være engasjert i å tyde en lege.
Forfatteren av artikkelen: Bacio
Registrering av artikkelen: Lozinski Oleg
Video av ELISA-analysen
Hvordan er ELISA analyse:
