PCR-diagnostikk. Hva er det i gynekologi, hepatitt, tuberkulose. Tyde tester som pass, kostnaden for

I de fleste tilfeller, pasientene må forholde seg til en slik situasjon, når eksamen eller Beregningene krever PCR sykdom diagnose. Det er viktig å forstå hva det er og hva som er nødvendig.

Polymerase kjedereaksjon (PCR) - det er en studie som bidrar til å identifisere mange sykdommer i de tidlige stadier av utviklingen. Dens vesen ligger i å finne en DNA eller RNA tilstede i en organisme patogen. PCR for å bestemme det forårsakende middel i tilfeller hvor andre typer av studier er ineffektive.

Hvorfor PCR diagnose er så populær?

Populariteten til denne metoden ligger i sin enkelhet og bredde i bruk. Den brukes av klinikere til å diagnostisere ulike sykdommer. Det gjør at du raskt utføre kompliserte kvantitative og genomisk forskning.

En av de viktigste medisinske anvendelser klassiske PCR-metoden er deteksjon av mikroorganismer, noe som kan føre til patologiske tilstander.

Det vesentlige ved PCR-analyse

PCR-diagnostikk (det er forklart molekylærbiologi) er en molekylær kloning metode som brukes for analyse av korte DNA-sekvens som er til stede i minimale mengder i prøver inneholdende en genetisk materiale. Denne fremgangsmåten er ofte referert til som "kopierings DNA".

PCR-diagnostikken in vitro (utenfor kroppen) i laboratoriet, og basert på den naturlige prosessen med å doble DNA før sin næring. Foruten å være i stand til å detektere de virus, bakterier eller andre mikroorganismer i prøven, kan PCR identifisering av deres kvantitet.

I sykdommer slik som infeksjon med hepatitt C-virus eller humant immunsviktvirus (HIV), viruset belastning er en god indikasjon på hvilket stadium av sykdommen er og hvor effektive er terapi.

Bevæpnet med denne informasjonen, kan leger bestemme når man skal starte behandling og for å overvåke prosessen. Dette gjør det mulig å foreta en individuell tilnærming til hver pasient.

PCR diagnose omfatter tre trinn, i hver av hvilke antallet av mål-DNA blir vesentlig større. Som et resultat av en slik reaksjon blir oppnådd over en milliard kopier av en original, eller "mål" DNA, noe som gjør det mulig å evaluere nærværet av viruset i kroppen. Dette er den grunnleggende trekk ved PCR-metoden.

Fordeler og ulemper med metoden

PCR-diagnostikk (hva det er beskrevet ovenfor) er blitt beskrevet i detalj Kerry Mullis i 1983. Siden metoden er svært populært i laboratoriet.

De viktigste fordelene med denne typen forskning er:

• allsidighet;
• hastigheten av resultatene;
• en høy sannsynlighet for å oppnå pålitelige resultater;
• spesifisitet;
• rekke sykdommer, som kan bestemmes.

Allsidigheten av PCR-metoden er muligheten til å bruke et hvilket som helst humant fysiologisk materiale. Selv ett hår nok for analyse.

Prosessen med databehandling, gjennom automatisering, kan det ta flere timer. Spesifisitet er å tildele en bestemt DNA-fragment som er karakteristisk for et bestemt patogen. Ved hjelp av PCR-analyse av mange sykdommer kan diagnostiseres som blir øket, og den latente fase av strømningen.

Men, til tross for det store antallet fordeler, har PCR diagnostiske metoden noen ulemper:

• muligheten for falske positive resultater;
• høy følsomhet;
• variasjon av mikroorganismer.

Hovedulempen ved fremgangsmåten er den manglende evne til å skjelne mellom PCR-levende mikroorganismer fra døde. Vanligvis, dette refererer til en situasjon når du skal vurdere hvor vellykket behandlingen. I dette tilfellet, hvis sykdommen behandles, døde celler er fortsatt noen tid i det menneskelige legeme og dets fullstendige oppdateringen krever en viss tid fra 4 til 6 uker.

Høy følsomhet er en fordel og på samme tid en ulempe. Noen mikroorganismer er til stede i små mengder i kroppen. Derfor, i dette tilfellet, er denne diagnostiske metoden ikke informativ, og rådet til å bruke andre typer forskning.

Eventuelle mikroorganismer kan mutere. Og selv til tross for at den spesifikke fragment brukt i forsterkning prosess som Minst endres, kan det likevel skaffe mutasjoner og bli usynlig for testsystemer. Denne situasjonen kan forklares ved det faktum at en rekke laboratorieforsøk av systemet kan vise helt forskjellige resultater.

På hvilke områder av metoden

PCR-undersøkelsen kan anvendes i klinisk praksis for identifisering av forskjellige sykdommer. Mye brukt i gynekologi, urologi, gastroenterologi, onkologi, etc.. I tillegg er det effektivt brukes i dataanalyse for å identifisere og etablere farskaps.

Denne type forskning er brukt i planleggingsfasen og under svangerskapet. Analyse av brenner-infeksjon er utført for å påvise nærvær av infeksjon hos kvinner. Sykdommer forårsaket av en av infeksjonene kan være mild form for kvinnen, men for å forårsake alvorlige misdannelser hos fosteret, til sin død.

Også diagnostisk PCR-metoden bidrar til å identifisere en genetisk predisposisjon for utvikling av visse sykdommer i fremtiden.

Som bringer infeksjon diagnose ved hjelp av PCR

PCR bidrar til å identifisere virus, bakterier og sopp.

De vanligste sykdommene som kan diagnostiseres med det:

• infeksjons nevrologiske sykdommer (meningitt, myelitt);
• maligniteter (leukemi, lymfom);
• virussykdommer (HIV, human papilloma virus, cytomegalovirus, enterovirus, hepatittvirus, røde hunder, adenovirus og al.);
• bakterieinfeksjoner;
• seksuelt overførbar infeksjon (ureplazmoz, chlamydia, trichomoniasis);
• sykdommer forårsaket av sopp (candidiasis, mykoplasmose);
• herpes;
• Filatov sykdom;
• tuberkulose, lungebetennelse, difteri, både viral og bakteriell opprinnelse;
• magesår, H. pylori infeksjon provosert av andre.

Hva er biologisk materiale undersøkte

Gitt sykdommen, symptomene, og objektiv undersøkelse av PCR-diagnostikk kan bruke en hvilken som helst væske eller fysiologisk karakter av et stykke stoff.

Dette kan være:

• blod,
• spytt;
• slim;
• urin;
• avføring;
• orofaryngealt pinne;
• stykke av det angrepne vev;
• synovialvæsken;
• skraping av vagina hos kvinner eller urinrøret hos menn;
• ejakulere;
• hår og andre.

I sykdommer av urogenitalsystemet er tatt urin vattpinne fra vagina hos kvinner eller urinrøret hos menn. Venøst ​​blod leid for diagnostisering av sykdommer slik som HIV, hepatitt-type, BRENNER-infeksjon.

For å utelukke eller bekrefte onkologi, under en operasjon blir fjernet stykker av vev for en biopsi.

Hvor å forberede for analyse

Spesielt preparater for studiet er avhengig av biomateriale, noe som gir opp. Vær også oppmerksom på at du trenger å eliminere mottak av antibiotika og andre legemidler. For å overvåke effektiviteten av behandlingen bør tåle intervall etter mottak av medikamenter i minst 4 uker.

Blod leie i morgen på tom mage. Urin og avføring bør plasseres i designet for dette, helt steril beholder. Således, før oppsamling av urin er nødvendig for å utføre hygiene ytre kjønnsorganer.

Hvis du leier en sverte, må du:

• ikke urinere i 3 timer;
• Det er ikke anbefalt å vaske og douche dagen før (for kvinner);
• per dag for å stoppe sex livet;
• Pap kvinner bør ta i midten av syklusen.

PCR-analyse stadier

Før starten av PCR, må DNA isoleres fra prøven. Isolering av DNA er en flertrinnsprosess som kan utføres manuelt eller instrumentelt.

Etter at prøvepreparering begynner PCR-trinns prosess:

• separasjon av mål-DNA (denaturering);
• forsterkning (multiplikasjon) av DNA-fragmenter;
• deteksjon (identifikasjon) i de amplifiserte DNA-fragmenter.

Den første fase av PCR kalles denaturering. Sin essens er at røret med DNA-prøven er oppvarmet til en høy temperatur (ca. 90 grader). På grunn av de høye temperaturer ødela de svake bindinger mellom nukleotider som danner molekyler kode. Resultatet er separasjon av dobbelttrådet DNA eller RNA i to separate tråder.

For "renhet" biomateriale forskningsstudie påløper spesiell løsning som løser de organiske stoffene. Varigheten av denne fase er avhengig av typen av materialet og patogenet.

PCR-diagnostikk (hva det er beskrevet ovenfor) i det andre trinnet utfører multiplikasjon av DNA-fragmentene på basis av de fleste DNA-infeksjon. PCR ikke kopiere hele nukleinsyren i prøven. Det kopier bare den spesifikke sekvens til den genetiske koden, en kort fragment (primer).

I den andre fasen røret avkjøles. Hele prosessen er automatisert ved hjelp av en PCR-maskin, som kalles en cycler eller termostat, og kan gjennomføres i løpet av få timer. PCR maskinen er programmert til å endre temperaturen i reaksjonsblandingen noen få minutter. Dette skjer for å korte fragmenter kunne ta kontakt med det enkelttrådete templatet.

Amplifisering foregår i 30-40 sykluser. I løpet av denne perioden, lege assistent kopier av DNA-fragmentet, og øker antallet av kjedereaksjonen metode. Således, med hver syklus antallet kopier øker til flere millioner eller milliarder.

I den tredje fase av studien er identifikasjon av tilstedeværelse av DNA av virus og bakterier. Dette oppnås ved fordelingen av den resulterende blandingen og å tilsette til det en spesiell løsning. Denne væsken kan DNA-fragmentene for å skaffe en viss farge under innvirkning av ultrafiolette stråler. Dette er en indikasjon på at de patogene bakterier er til stede i menneskekroppen.

PCR under svangerskapet

PCR-diagnostikk (hva det er beskrevet ovenfor), kan bli administrert for første gang i løpet av svangerskap, som er obligatorisk. Denne metoden bidrar til å identifisere skjulte infeksjoner og trusselen av misdannelser hos fosteret.

For analyse ved hjelp av:

• vaginal pinne;
• veneblod;
• urin;
• fostervann og placenta vev;
• spinal eller leddvæske.

Det smittsomme sykdommens art, som kan påvirke fosterutvikling, forårsaker defekter, forårsake for tidlig fødsel og abort. De er spesielt farlig i første trimester og i de fleste tilfeller, er en medisinsk indikasjon for abort. Disse infeksjonene har et felles navn TORCH-kompleks.

PCR-analyse bidrar til å etablere nærværet eller fraværet av infeksjoner hos gravide kvinner. Ofte utført på scenen for planlegging av graviditet eller i første trimester. I tilfelle av et positivt resultat, tar det gjentok studien. Det var først etter bekreftelse av resultatene etter behandling.

PCR for påvisning av HIV-

PCR-metode for diagnostisering av HIV-infeksjon er en dyr analyse og brukes for spesielle indikasjoner. Disse inkluderer donasjon, så vel som det kan gis til pasienter som har lidd i en bilulykke med mennesker, HIV bærere.

PCR bidrar til å påvise infeksjon i et tidlig stadium før legemet har utviklet antistoffer mot HIV. Resultatet er en høy prosentandel av sannsynlighet studien kan vise innen 5-14 dager etter gjennomtrengning av viruset.

I andre tilfeller nærværet av viruset i menneskekroppen bidrar til å etablere imunnofermentny assay (ELISA). Det definerer HIV-antistoff i humant blod som begynner å produsere i løpet av 1-3 måneder etter infeksjon. Kvantitativ bestemmelse av analyse av mikroorganismer er det nødvendig å overvåke behandling av pasienter.

PCR for påvisning av hepatitt

Hepatitt C-virus er en alvorlig sykdom som kan føre til utvikling av cirrhose. Inkubasjonsperioden, noe som kan være opp til 12 måneder, gjør at viruset ikke manifestere seg, er pasienten praktisk talt ikke smittsom, og viruset ikke kan identifiseres ved rutinemessige blodprøver.

Oftest da brått behandling, blir sykdommen kronisk og truet av flere komplikasjoner.

Ved infeksjon med hepatitt B, er inkubasjonstiden lang, og ikke de første symptomene kan observeres allerede etter 4 uker. Det var i løpet av denne perioden kan ELISA viser tilstedeværelse av viruset i kroppen.

PCR kan du:

• for å identifisere sykdoms ved en inkubasjonstid utviklingsstadium;
• tillate tvilsom analyser av andre studier;
• for å evaluere effektiviteten av antiviral terapi.

Fravær av DNA-HBV utført etter behandlingen - et tegn på dens effektivitet.

Analyse for tuberkulose

Utvikling provoserer tuberkulose tuberkel bacillus som kan trenge inn i kroppen ved luftbårne dråper. Sykdommen har to former: skjulte og åpenlys. I det første tilfellet, er en smittet person ikke bærer av infeksjon og mykobakterier i sputum ikke kan påvises selv ved PCR. Faren for denne form har likevel, som kan overføres til en åpen trinn.

Åpne (aktive) trinnet er en fare for andre, selv i tilfelle av streng overholdelse av reglene for personlig hygiene. For diagnostisering av sykdommen ved hjelp av fluorografi, og røntgen tomografi av toraks. Også anvendes for dette formål tuberkulirovannuyu hudprøve (mantoux test). Men den mest effektive metoden for forskning er PCR.

I bruk som testprøvene:

• blod,
• slim;
• bronkiene væske.

PCR for påvisning av HPV

Diagnose av HPV utført i tilfelle av symptomer slik som papillomer og vorter i underlivet. Studien også tildelt på scenen for planlegging av graviditet i tilfelle av infertilitet, spontanaborter, og også i en situasjon med infeksjon av en av partnerne, så vel som en av overføringsmekanismer - seksuell.

Den farligste er ikke selve tilstedeværelsen av viruset i kroppen, og dets type. Noen av typene (16 og 18) er høy risiko og kan føre til livmorhalskreft hos kvinner. PCR-fremgangsmåten kan bli administrert i forbindelse med andre typer forskning. For å analysere den mest brukte pinne fra kjønnsorganene. Blod, urin og utflod som et biomateriale som brukes ytterst sjelden.

herpes

Denne testen diagnoser genital infeksjon med herpes simplex virus type 1 og 2 (HSV1 / HSV2). Med et positivt resultat, HSV2, bør testes for HIV og andre kjønnssykdommer. For analyse krever venøst ​​blod til pasienten. kan også bli undersøkt urin, isolasjon og innholdet utslett når symptomene.

Integrert PCR-screening

I tilfellet av registrering eller komplekse PCR-analyser kan tildeles for å forebygge sykdommer. Oftest initiator tjener til pasienten, er det tilfeller der en omfattende undersøkelse er indisert for forebygging av utbrudd av visse sykdommer i et bestemt område.

PCR-12 - er en omfattende studie som dekker følgende infeksjoner:

1. Hepatitt.
2. HIV.
3. Herpes.
4. Kjønnssykdommer.
5. Tuberkulose.
6. Encefalitt.
7. Candidiasis.
8. Helicobacter infeksjon.
9. Cytomegalovirus.
10. Mononukleose.
11. Oncovirus.
12. Listeriose.

Transkripsjon PCR-analyse

Etter analyse av PCR-positive eller negativt resultat kan høres.

I tilfelle av et positivt resultat, anbefaler vi re-commissioning tester og kvantitativ PCR studien. Dette bidrar til å bestemme konsentrasjonen av infeksjoner i kroppen for oppnevning av riktig behandling.

Nøyaktigheten av PCR-diagnostikk

I de fleste tilfeller gir PCR diagnostikk svært nøyaktige resultater. Men i noen tilfeller, for å bekrefte riktigheten av diagnosen krever ekstra forskningsmetoder.

På grunn av det som kan få en falsk resultat?

Falske positive resultater kan oppnås som et resultat av feil innsamling og analyse av de mest forskningsprosedyrer.

Pasienten kan være den skyldige av falsk informasjonsinnhold i tilfelle av utilstrekkelig forberedelse for levering av biomaterialet. Utstyrte laboratorier og profesjonell lege kan direkte påvirke resultatene av studien.

Hvor å gå PCR diagnostikk

PCR-diagnostikk utføres i private klinikker og laboratorier for en legetime eller på initiativ fra pasienten med henblikk på forebygging. Preference bør gis til klinikker og laboratorier med moderne utstyr, at det ikke er det første året i det medisinske markedet og har vist seg.

PCR-analyse: kostnadene og tiden

Denne metoden for diagnostisering av høy verdi er forskjellig. Prisen varierer fra 200 til 500 rubler for hver art. Omfattende kartlegging av tilstedeværelsen av flere infeksjoner kan betydelig spare penger, sammenlignet med betaling av hver enkelt studie.

Undersøkelsesperioden avhenger av type infeksjon, og kan ta alt fra 1 til 5 dager. Også disse tallene er avhengig av utrustning av laboratorier og opplæring av helsepersonell.

PCR-diagnostikk (som det er beskrevet i detalj i denne artikkelen) er den mest nøyaktige og rask metode for studien. Det er en av de viktigste funnene i det tjuende århundre. innen medisin.

Med denne metoden ble det mulig å kurere mange sykdommer. Men ikke glem at PCR har noen ulemper, og dens effektivitet stiger ofte i forbindelse med andre metoder.

Registrering av artikkelen: Vladimir I

Videoer om PCR diagnostikk

Om PCR nøyaktighet: